Principy každé PCR, bez ohledu na vzorek DNA, jsou stejné.
K vytvoření PCR je zapotřebí pět základních „ingrediencí“. Za pochodu vám přesně vysvětlíme, co každý z nich dělá. Tyto jsou:
- DNA templát, který má být zkopírován
- primery, krátké úseky DNA, které iniciují reakci PCR, navržené tak, aby se navázaly na obě strany části DNA, kterou chcete zkopírovat
- nukleotidové báze DNA?(také známé jako dNTP). Báze DNA (A, C, G a T) jsou stavebními kameny DNA a jsou potřebné k vytvoření nového řetězce DNA.
- enzym Taq polymeráza?přidat nové báze DNA
- pufr pro zajištění správných podmínek pro reakci.
PCR zahrnuje proces zahřívání a chlazení nazývaný tepelné cyklování, které je prováděno strojem.
Existují tři hlavní fáze:
- Denaturace– když se dvouřetězcová templátová DNA zahřeje, aby se rozdělil na dvě jednoduchá vlákna.
-
Žíhání– když se teplota sníží, aby se primery DNA mohly připojit k templátové DNA.
-
Prodlužování– když se teplota zvýší a nový řetězec DNA vytvoří enzym Taq polymeráza.
Tyto tři fáze se opakují 20-40krát, přičemž počet kopií DNA se pokaždé zdvojnásobí.
Kompletní PCR reakci lze provést za několik hodin nebo dokonce za méně než hodinu na určitých vysokorychlostních zařízeních.
Po dokončení PCR lze ke kontrole množství a velikosti produkovaných fragmentů DNA použít metodu zvanou elektroforéza.