Nevím, jestli máte potřebu často nakupovat spotřební materiál. Pokud často nakupujete laboratorní spotřební materiál, můžete zjistit, že různí výrobci mohou své produkty označovat jako bez enzymů, bez pyrogenů a bez endotoxinů, zejména pokud jde o některé. To platí zejména pro spotřební materiál pro buněčnou biologii a analytická biologie, jako jsou běžné 15ml a 50ml centrifugační zkumavky, lahvičky na buněčné kultury, misky na buněčné kultury, destičky pro buněčné kultury, kryogenní zkumavky, PCR destičky a další produkty. Produkty s těmito popisy mohou být také dražší než běžné podobné produkty. Co tedy tato tvrzení znamenají a jaký dopad mají na naše experimenty? Zde je stručný úvod k tomu, jak bychom měli při nákupu vybírat.
Pyrogen: Pyrogen se týká pyrogenní látky, která může způsobit abnormální zvýšení tělesné teploty po vstříknutí do těla. Pyrogeny v širokém smyslu zahrnují bakteriální pyrogeny, endogenní vysokomolekulární pyrogeny, endogenní nízkomolekulární pyrogeny a chemické pyrogeny. Zde uváděné "pyrogeny" se týkají hlavně bakteriálních pyrogenů, což jsou metabolity určitých mikroorganismů, bakteriálních mrtvol a endotoxinů.
Enzymy: Každý se naučil o enzymech na střední škole. Jako druh biologického katalyzátoru mohou enzymy účinně katalyzovat různé biochemické reakce v našich organismech. Nicméně, když většina produktů říká, že jsou bez enzymů, ve skutečnosti, přesněji, neoznačují všechny enzymy, ale nukleázy. Mnoho výrobců také píše DNase-free a RNase-free, obojí znamená totéž. Nukleázy mohou rozkládat molekuly nukleových kyselin. Existují enzymy, které specificky degradují DNA nebo RNA. Existují také enzymy s menší specificitou, které mohou působit na molekuly DNA i RNA.
Endotoxiny: Endotoxiny jsou obecným názvem pro toxické látky přítomné v buňkách gramnegativních bakterií. Je součástí buněčné stěny různých gramnegativních bakterií. Toxin uvolněný lýzou bakterií je lipopolysacharid. Obecně se má za to, že endotoxin je druh pyrogenu, který je obecně přijímán při výrobě léků: pokud není endotoxin, není ani pyrogen. Proto lze během výroby provádět pouze testování endotoxinů bez testování pyrogenů.
Vliv:
Pyrogeny a endotoxiny mohou stimulovat tělo a způsobit jeho zahřátí. Ve farmaceutických, klinických a dalších oborech jsou kvůli bezpečnosti lidí obvykle požadavky na množství pyrogenů a endotoxinů. Čínský lékopis také poskytuje jasné metody pro detekci pyrogenů a endotoxinů. Když jsou nukleázy zapojeny do molekulárních laboratoří, protože mají funkci rozkladu DNA, pravděpodobně degradují fragmenty cílové molekuly. Například v experimentech PCR, pokud dojde ke kontaminaci nukleázami, nemusí existovat žádná hodnota CT, což vede k falešně pozitivním výsledkům. Spotřební materiál, jako jsou špičky pipet a zásoby související s PCR, proto obvykle neobsahují nukleázy.
Pokud jde o detekci pyrogenů a endotoxinů:
Následuje stručný úvod do obsahu testování pyrogenů a endotoxinů v lékopisu.
Detekce pyrogenů: Všeobecná kapitola Čínského lékopisu 1142 popisuje použití králičí metody pro detekci pyrogenů. Použijte zdravé a kvalifikované králíky, nitrožilně aplikujte určitou dávku testovaného přípravku králíkům a sledujte zvýšení tělesné teploty králíků během stanovené doby. Zkušební náčiní, které je v kontaktu se zkoušeným předmětem, by mělo být sterilní a bez pyrogenů. K odstranění pyrogenů se obvykle používá sterilizace suchým teplem (250 stupňů, více než 30 minut), ale lze použít i jiné vhodné metody. Pokud tělesná teplota testovaného králíka během určité doby stoupne na určitou normu, je pyrogenní test testovaného produktu považován za nevyhovující.
Detekce endotoxinu: Detekce endotoxinu byla dříve prováděna mezinárodně pomocí reagenční metody Limulus. Specifické metody zahrnují gelovou metodu a fotometrickou metodu. Činidlo Limulus může aglutinovat s bakteriálním endotoxinem za vzniku změny gelu nebo zákalu a obsah endotoxinu lze určit měřením této změny. Činidlo Limulus je činidlo extrahované z krve mořského členovce podkovovitého kraba. Vrápenci jsou proto ve světě hojně loveni a u nás se stali národním druhem chráněným živočichem. V současné době FDA schválila metodu rekombinantního faktoru C, která nahrazuje činidlo Limulus. Tento zákon byl také zmíněn v hlavních zásadách lékopisu mé země.
Jak vybrat:
Ve skutečnosti není těžké si po pochopení těchto pojmů vybrat. Hlavní je vybrat si podle vlastních potřeb. Obecně je běžnější spotřební materiál bez enzymů a pyrogenů, zatímco produkty bez endotoxinů jsou relativně vzácné. Pokud na ně samotný experiment nemá vysoké požadavky, můžete skutečně použít běžný spotřební materiál. Například při centrifugaci, pokud se jedná o centrifugované buňky nebo příbuzné komponenty, je nejlepší použít centrifugační zkumavky bez enzymů a pyrogenů, a pokud jde jen o běžnou kapalinu, centrifugaci lze skutečně provádět v obyčejné centrifugační zkumavce. Kromě toho je to také problém, který bude mít mnoho uživatelů. Při nákupu centrifugačních zkumavek u některých obchodníků se zeptají, zda lze centrifugační zkumavku znovu použít. Tato otázka ve skutečnosti závisí na situaci, protože centrifugační zkumavka byla jednou použita. Je do určité míry znečištěný a ani tlaková parní sterilizace nedokáže tyto znečištění zcela odstranit. Pokud se tedy znovu použije, záleží na vlastních potřebách uživatele pro experiment.
V konečném důsledku všechny produkty slouží experimentátorům a experimentům. Kvůli produktům nemůžete ovlivnit své experimenty. Místo toho si musíte vybrat vhodné produkty na základě vlastních experimentů.